Para peneliti yang mempelajari vesikel ekstraseluler (EV) sering menghadapi tantangan terkait standardisasi, reproduktifitas, dan sensitivitas. Peralatan yang andal dan reagen berkualitas tinggi sangat penting untuk membuat penemuan terobosan di bidang komunikasi antar sel yang kompleks.
Trombosit, meskipun merupakan fragmen sel kecil dalam darah, mengandung bahan bioaktif yang kaya dan memainkan peran penting dalam pembentukan eksosom dan regulasi fungsional. Bersumber secara hati-hati dari donor yang sehat, eksosom yang berasal dari trombosit manusia diisolasi dan dimurnikan menggunakan teknik filtrasi aliran tangensial (TFF) dan kromatografi eksklusi ukuran (SEC) yang canggih. Eksosom ini mempertahankan sifat biologis yang melekat, menjadikannya ideal untuk mempelajari fungsi EV, berfungsi sebagai kontrol positif, dan mengkalibrasi metode analisis.
Untuk memaksimalkan aktivitas dan stabilitas eksosom, proses liofilisasi tingkat lanjut secara efektif menghilangkan kelembapan, memperpanjang umur simpan hingga 24 bulan tanpa memerlukan penyimpanan rantai dingin yang ketat (penyimpanan yang disarankan pada suhu 4°C). Stabilitas jangka panjang ini menyederhanakan perencanaan eksperimental dan manajemen inventaris sekaligus memastikan akses yang konsisten terhadap materi penelitian berkualitas tinggi.
Eksosom terliofilisasi ini berfungsi sebagai kontrol positif yang andal di berbagai teknik analisis EV. Di bawah ini adalah pedoman penggunaan yang disarankan (penyesuaian mungkin diperlukan berdasarkan kondisi eksperimental tertentu):
| Teknik Aplikasi | Kuantitas yang Direkomendasikan |
|---|---|
| Analisis Pelacakan Nanopartikel Fluoresen (F-NTA) | 1µg |
| Aliran Sitometri | 5µg |
| ELISA | 10-20µg/sumur |
| noda barat | 10-20µg/jalur |
Ultrasentrifugasi dan EV yang diisolasi TFF diwarnai menggunakan Kit Deteksi Tetraspanin F-NTA EV dan dianalisis dengan ZetaView® x30, menunjukkan karakterisasi skala nano yang tepat. Validasi tambahan menggunakan reagen pendeteksi F-NTA CD9, CD63, dan CD81 mengkonfirmasi pola ekspresi penanda spesifik pada EV yang diturunkan dari trombosit.